復(fù)方丹參滴丸對高脂血癥大鼠血小板功能的影響

目的分析高脂血癥大鼠血小板功能的變化，探討復(fù)方丹參滴丸對高脂大鼠血小板功能的影響。

方法44只Wistar大鼠隨機分為正常對照組、高脂模型組、復(fù)方丹參滴丸組[160mg/kg·d]、阿托伐他汀組[10mg/kg·d]，分組干預(yù)4周后檢測血脂水平:總膽固醇CHO、甘油三酯TG、低密度脂蛋白膽固醇LDL-C、高密度脂蛋白膽固醇HDL-C的水平。應(yīng)用酶聯(lián)免疫法測定血小板表面α-顆粒膜糖蛋白CD62P的濃度，流式細胞術(shù)FCM檢測血漿α顆粒膜蛋白-140GMP140濃度。

結(jié)果高脂血癥組CHO、LDL-C顯著升高;CD62P及GMP140水平明顯升高；復(fù)方丹參滴丸組和阿托伐他汀組GMP140及CD62P水平顯著降低。

結(jié)論高脂血癥能夠促使血小板活化，復(fù)方丹參滴丸具有與阿托伐他汀效果相似的抑制血小板活化的作用。

高脂血癥是心腦血管疾病的重要危險因素，血小板活化在血液黏度增高、血栓形成，以及動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。血小板表面α-顆粒膜糖蛋白CD62P及血漿α顆粒膜蛋白-140GMP140水平反應(yīng)血小板活化功能，是血小板活化的標志物，能特異地與活化血小板結(jié)合。我們通過對高脂血癥大鼠血小板功能的變化及復(fù)方丹參滴丸的干預(yù)研究，來評價復(fù)方丹參滴丸對于高脂血癥大鼠血小板功能的影響，以期對臨床有所幫助。

A材料與方法

動物及分組

Wistar大鼠44只，體重269～298g，購自中國醫(yī)學科學院遺傳研究所實驗動物中心，合格證號:SCXK京2005-0013。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機分組，正常對照組常規(guī)飼料喂養(yǎng)10只，高脂飼料組34只。高脂飼料配方:2%膽固醇、0.35%膽酸鈉、0.3%丙基硫氧嘧啶、5%白糖、10%豬油、82.35%基礎(chǔ)飼料。4周后高脂模型制造成功，隨機分成3組:高脂對照組14只、復(fù)方丹參滴丸組10只、阿托伐他汀組10只，分別給予高脂飼料、復(fù)方丹參滴丸天士立公司原料藥凈膏160mg/kg·d、阿托伐他汀北京嘉林藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)10mg/kg·d。除正常對照組外繼續(xù)高脂喂養(yǎng)，復(fù)方丹參滴丸、阿托伐他汀溶于2mL蒸餾水中每天罐胃1次，其余組每天給予蒸餾水2mL罐胃，干預(yù)4周。高脂飼料組、阿托伐他汀組、復(fù)方丹參滴丸組各死亡1只，完成試驗動物41只。

標本采集

在分組喂養(yǎng)前及高脂干預(yù)4周后，經(jīng)內(nèi)眥靜脈取血進行血脂分析。藥物干預(yù)4周后，各組經(jīng)腹主動脈使用一次性采血針及負壓真空采血管進行標本采集。前2mL進行血脂分析，中間1.5mL用1%多聚甲醛PFA1.5mL和3.8%枸櫞酸鈉0.3mL的負壓抗凝管采血進行CD62P流式細胞儀FCM檢測，最后2.0mL用EDTA抗凝管采血，分離血漿測定GMP140水平。

血脂的測量

血脂分析指標包括:膽固醇CHO、甘油三酯TG、高密度脂蛋白HDL-C、低密度脂蛋白LDL-C4項指標。上述指標在我院檢驗科生化室由專業(yè)檢驗師檢測。全自動生化儀，型號:RX-2000，美國TECHNICON公司生產(chǎn)。

CD62P的流式細胞術(shù)分析

熒光標記抗體購自SANTACRUZBIOTECHNOLOGYINC公司，CD61PE批號:sc-7311和CD62PFITC批號:sc-8419。采血后全血靜置固定20min后，取5μL標本加入CD61PE、CD62PFITC熒光標記單抗各5μL，室溫孵育20min后，加PBS至1mL重懸，應(yīng)用COULTER公司的BECKMANCOULTERDU800型FCM進行分析。用SSC-FSC散點圖中找出血小板群R1、CD61PE/CD62PFITC散點圖中畫出血小板門及活化血小板。每份標本測定10000個血小板。對照管分別加入5μL羊抗兔IgGPE、羊抗兔IgGFITC作為對照。

GMP140測定

采血后分離血漿于-80℃冰箱凍存?zhèn)溆?，?yīng)用太陽公司GMP140酶聯(lián)免疫試劑盒，嚴格按照說明書進行測量。

B統(tǒng)計方法

所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差±s表示，應(yīng)用SPSS11.5軟件處理，兩組之間均數(shù)比較應(yīng)用t檢驗，多組間兩兩比較應(yīng)用方差分析。

結(jié)果

基礎(chǔ)體重及血脂水平分析

高脂干預(yù)之前，測定10只常規(guī)飼料組與隨機抽取10只高脂飼料組大鼠的體重、血脂分析各指標無明顯差別，即兩組之間的基礎(chǔ)資料具有可比性（見表1）。

高脂喂養(yǎng)4周后血脂水平分析

高脂喂養(yǎng)4周后，常規(guī)飼料組大鼠10只和隨機抽取高脂飼料組大鼠16只進行血脂檢測，CHO、TG、LDL-C水平明顯升高、HDL-C/CHO明顯降低，提示大鼠高脂模型制造成功（見表2）。

復(fù)方丹參滴丸干預(yù)組血脂水平、血漿GMP140及血小板表面CD62P水平分析

繼續(xù)分組干預(yù)4周后檢測血脂水平、GMP140、CD62P等指標。正常對照組、高脂對照組、復(fù)方丹參滴丸組、阿托伐他汀組TG及HDL-C水平未見明顯差別P>0.05。高脂對照組CHO、LDL-C最高，HDL-C/CHO最低，GMP140、CD62P水平最高。說明高脂血癥組血小板活化程度最高。阿托伐他汀組血脂指標明顯改善的同時，GMP140、CD62P水平也明顯降低。復(fù)方丹參滴丸組CHO、LDL-C、HDL-C/CHO與高脂血癥組相比有改善的趨勢，但尚未達到統(tǒng)計學顯著性，但是GMP140、CD62P水平也明顯下降（見表3）。

由表3進一步分析可見，與高脂血癥組比較，復(fù)方丹參滴丸組與阿托伐他汀組GMP140、CD62P水平均明顯降低，且兩組之間無顯著差別，而且復(fù)方丹參滴丸及阿托伐他汀組，CD62P水平達到正常對照組水平，說明復(fù)方丹參滴丸與阿托伐他汀組干預(yù)效果相似GMP140:P=0.501，CD62P:P=0.705。

C討論

血脂異常、血小板活性增加和血管阻塞性并發(fā)癥的危險性密切相關(guān)，在降脂的同時降低血小板活性在血栓性疾病的臨床治療和預(yù)防心臟事件的發(fā)生方面有著十分重要的意義。GMP140以血小板膜CD62P和血漿GMP140兩種形式存在，是反映血小板活化最具有特異性的標志物。在血栓形成過程中，GMP140起始動作用，使血小板與中性粒細胞黏附、聚集，形成血栓。FCM檢測CD62P表達是評價血小板活化功能較為準確的方法。本研究顯示，高脂血癥大鼠血漿GMP140水平和血小板CD62P表達明顯增加，也說明高脂血癥促進血小板的活化。

復(fù)方丹參滴丸雖然沒有明顯的降低血脂水平的作用，但能夠顯著降低高脂血癥大鼠CD62P及GMP140的水平，而且降低的程度與阿托伐他汀相似，說明復(fù)方丹參滴丸抑制血小板活化的作用與血脂水平無關(guān)。不穩(wěn)定心絞痛UA患者存在血小板活化及纖溶活性異常，表現(xiàn)為GMP140含量升高、組織型纖維蛋白溶酶原活化劑t-PA活性減低和PAI-1活性增高。復(fù)方丹參滴丸能使UA患者血漿GMP140含量明顯降低，t-PA活性明顯升高，說明復(fù)方丹參滴丸能有效抑制血小板活化反應(yīng)，改善纖溶活性。有研究表明復(fù)方丹參滴丸對血小板聚集率抑制作用基本上等同于、甚至優(yōu)于阿司匹林，而臨床不良反應(yīng)較阿司匹林少。

本研究顯示:阿托伐他汀在顯著降低CHO、LDL-C、提高HDL-C/CHO比值的同時，明顯降低GMP140激CD62P水平，說明阿托伐他汀在有效調(diào)節(jié)脂代謝作用同時顯著抑制血小板活性，與Spencer研究結(jié)果相同。

來源：醫(yī)藥經(jīng)濟報

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